Cum să denature o proteină: 7 pași (cu imagini)

Poate doriți să denaturați o proteină pentru un proiect științific sau poate că ați citit despre mâncarea denaturată și doriți să știți cum funcționează acest lucru. Denaturarea este procesul prin care o proteină își pierde forma și structura datorită acțiunilor de la forțele externe, inclusiv căldura, radiațiile, acizii și solvenții. Solvenții organici denumi de obicei proteine. Modul exact pe care îl denumiți o proteină depinde de cea pe care doriți să o lucrați, deoarece toți necesită agenți de denaturare diferiți la diferite niveluri. Majoritatea proteinelor pot fi denaturate, dacă știți ce să se schimbe în mediul proteinei.

Pași

Metoda 1 din 2:

Denaturarea unei proteine

1. Utilizați căldură. Căldura este una dintre cele mai ușoare căi și cele mai comune modalități de a denumi o proteină. Când proteina în cauză este prezentă în alimente, pur și simplu gătit alimentele vor denumi proteinele. Multe proteine pot fi denaturate prin expunerea lor la o temperatură de sau peste 100 ° C (212 ° F). Acest lucru permite proteinelor să coaguleze și să reducă solubilitatea.

Durata expunerii depinde de ceea ce expuneți la căldură. Un ou, de exemplu, poate găti într-o tigaie pe căldură medie în cinci minute, în timp ce o friptă poate dura ore de gătit într-un cuptor.

Imagine intitulată Denaturarea unei proteine Pasul 2

2. Aplicați alcoolul. Alcoolul perturbă legăturile de hidrogen care apar între grupele amide ale unei legături peptidice. Când o proteină este expusă la o soluție de alcool, moleculele de alcool formează legături noi cu lanțul de proteine. Utilizați o soluție de 70% alcool pentru a rupe prin peretele celular al bacteriilor și denaturarea proteinei.

Alcoolii concentrați pot fi periculoși, deoarece sunt atât inflamabile, cât și toxice. Purtați întotdeauna echipamente de siguranță complete, inclusiv mănuși și protecție a ochilor și mâner într-un mediu sigur, controlat de temperatură.

Imagine intitulată denaturarea unei proteine 3

3. Schimbați Ph. Structura internă a unei proteine poate fi defalcată atunci când mediul său este foarte acid sau foarte alcalin, deoarece acestea perturbe legăturile ionice care dețin împreună punțile de sare ale proteinei. Adăugați o soluție acidă sau de bază la proteină. Mediul înconjurător trebuie să fie la un pH de peste 10 sau sub 4 pentru a încuraja denaturarea. Dacă induceți schimbarea cu acid, pH-ul ar trebui să fie între 2 și 5.

Schimbarea pH-ului poate ioniza un aminoacid, în funcție de pKa din fiecare grup funcțional din acel aminoacid. De asemenea, puteți ioniiza grupul amino sau grupul carboxil prezent în aminoacid.

Imagine intitulată denaturarea unei proteine Pasul 4

4. Încercați săruri de metale grele. Metalele grele pot perturba legăturile în proteină, determinând-o să-și piardă structura. Sărurile metalelor grele, cum ar fi mercurul și plumbul, pot fi folosite pentru a denumi diferite proteine. Astfel de săruri sunt disponibile de la majoritatea furnizorilor chimici și ar trebui să fie utilizate întotdeauna cu precauție și echipament de siguranță adecvat, inclusiv mănuși și protecție a ochilor.

Metalele grele pot interacționa cu grupările lanțului lateral al unei proteine pentru a forma complexe. Metalele grele oxidează, de asemenea, lanțurile laterale de aminoacizi ale proteinei.

Metoda 2 din 2:

Rentificarea proteinelor

1. Determinați dacă o proteină se poate refold. Unele forme de denaturare sunt permanente, în timp ce altele pot fi anulate. Gătitul unui ou sau a unei carne, de exemplu, nu poate fi anulat, dar o proteină care a fost expusă unui pH ridicat poate să-și recapete forma atunci când este pus într-un mediu mai neutru.

Indiferent dacă proteina se poate refold va depinde de ADN-ul său. ADN-ul va deține informațiile necesare pentru ca proteina să se întoarcă la starea sa nativă.

Imagine intitulată denaturarea unei proteine Pasul 6

2. Îndepărtați factorul de denaturare. Returnați mediul în jurul proteinei în stază și îndepărtați elementul de denaturare. Scoateți acidul sau baza, de exemplu sau aduceți proteina înapoi la o temperatură mai rezonabilă.

Imagine intitulată Denatura o etapă de proteină 7

3. Utilizați un kit de renaturare. Multe companii de consum de laborator vinde kituri de renaturare care vă permit să economisiți pentru cei mai buni parametri pentru a încuraja renaturarea. Astfel de kituri pot fi deosebit de utile dacă vă uitați la proteine într-un cadru de laborator sau experimental.

sfaturi

O proteină denaturată își pierde structura de cartier, terțiar și secundară, care este evidentă în starea sa natală, dar structura sa principală va rămâne.

O proteină denaturată își pierde și o parte din bioactivitatea sa, în unele cazuri, ca și în cazul enzimelor, pierzând capacitatea de a funcționa. De exemplu, substraturile nu mai pot fi capabile să se lege la enzimele care au fost denaturate.

Proteina denaturată își poate pierde solubilitatea într-o soluție.

De asemenea, puteți denatura acizii nucleici utilizând tehnici de laborator pentru a separa firele.

Partajați pe rețeaua socială: